Молочнокислі бактерії відіграють важливу роль у приготуванні тіста, какао та силосу. Незважаючи на близьку спорідненість, патогенні представники загону Lactobacillales (наприклад, пневмококи Streptococcus pneumoniae) зазвичай виключаються із групи молочнокислих бактерій.

Молочнокислі бактерії традиційно використовуються у харчовій промисловості при виготовленні кисломолочних продуктів, у хлібопеченні, консервуванні фруктів та овочів. Дуже важлива роль молочнокислих бактерій у сільському господарстві під час консервування кормів.

Зброджуванням молока при додаванні культури молочнокислих бактерій виробляють сметану, сир, йогурт, кисле молоко. При змішаному типі бродіння (молочнокислого та спиртового) отримують кефір, кумис, мацони (кавказький напій), біфідок.

У промисловості бактерії використовують у очищенні стічних вод, для ліквідації розливів нафти, при отриманні сиру та йогурту, відновленні золота, паладію, міді та інших металів з руд, а також у біотехнології, для отримання антибіотиків та інших сполук.